כרומטוגרפיה של טור קונבנציונאלי
2. עמוד כרומטוגרפי (סוג סיבוב)
3. טור כרומטוגרפי (מדריך)
*** מחירון עבור מלא לעיל, ברר מאיתנו להגיע
תיאור
פרמטרים טכניים
כרומטוגרפיה של טור קונבנציונאלימנצל את ההבדל ביחסי ההפצה של חומרים שונים בין השלב הנייח לשלב הנייד, או ביכולות השמירה השונות של שלבים קבועים ביחס לחומרים שונים, כדי להשיג הפרדת חומרים. כאשר התערובת זורמת דרך העמוד הכרומטוגרפי עם השלב הנייד, היא תתקשר עם השלב הנייח בעמודה (כגון פירוק, ספיחה וכו '). בשל ההבדלים בתכונות הפיזיקליות והכימיות ובמבנים של כל רכיב בתערובת, גם גודל וחוזק האינטראקציות שלהם עם השלב הנייח משתנים. תחת אותו כוח מניע, זמן השמירה של כל רכיב בשלב הנייח שונה, כך שהרכיבים בתערובת זורמים מהעמודה בסדר מסוים, ומשיגים הפרדה.
פָּרָמֶטֶר
איתור שאריות הדברה
 |
 |
 |
 |
לעתים קרובות אנו אומרים את זהכרומטוגרפיה של טור קונבנציונאליהיא למעשה הפרדת כרומטוגרפיה בעמודות, המכונה גם כרומטוגרפיה של עמודות. זה הומצא לראשונה ומשמש את המדענים הרוסים בשנת 1903. הוא ריסק תמיסה של פיגמנטים צמחיים לאבקת סידן פחמתי ומצא להקות צבע שונות על אבקת הסידן פחמתי מלמעלה למטה. על ידי הפרדת וחילוץ להקות צבע שונות, התקבלו כלורופיל טהור יחסית, לוטאין וכו '.
לאחר מאה שנות פיתוח, שיטה זו הפכה לבוגרת יחסית, והשלב הנייח התפתח גם מאבקת סידן פחמתי יחידה לאלומינה (שניתן לחלק אותם לחומציות, ניטרליות, אלקליות), סיליקה ג'ל, מופעל פחמן וכו ', ביניהם ג'ל סיליקה הוא הג'ל הנפוץ ביותר במעבדות עיקריות, בדרך כלל מחלקת שלב של שלב ושלב רגיל.
בדרך כלל יש לטהר ולהפעיל את השלב הנייח (סיליקה ג'ל), וגודל החלקיקים צריך להיות אחיד. בתיאוריה, ככל שגודל החלקיקים קטן יותר ושטח הפנים גדול יותר למסת יחידה, כך יכולת הספיחה גבוהה יותר ויכולת אפקט ההפרדה טוב יותר.
עם זאת, בשימוש מעשי, כאשר חלקיקי הפאזה הקבועה קטנים מדי, ישנם לעתים קרובות שני מצבים: האחד הוא שהם קלים יותר במשקל וצופים בקלות באוויר (סיליקה ג'ל לא יכולה להיות מושפלת על ידי גוף האדם, וככל שהוא עדין יותר, כך הוא רעיל יותר); שנית, חלקיקים קטנים יכולים להוביל גם לפערים קטנים בין חלקיקים, וכתוצאה מכך קצב זרימה ממס איטי וצריכת זמן; הגודל הגדול ביותר של סיליקון לוקח סיליקון, הגודל הגדול ביותר המשומש באופן מסחרי הוא כרגע 200-300.
מבחינת שיטות העברת עמודות, בנוסף לציוד הניתוח האוטומטי כגון הכנת זרימת קדימה, הכנת שלב נוזלי יעיל ומכונות העברת עמודים שהוזכרו קודם לכן, העברת העמודים הידנית מחולקת בעיקר לשלושה סוגים: העברת עמודות לחץ אטמוספרי, העברת עמודות דיכאון ועובר עמודת לחץ.
ביניהם, הדיכאון דרך העמודה מביא ליעילות ספיחה לקויה כתוצאה מקצב הזרימה המהיר של ה- Eluent, מה שמוביל לאובדן של מרבית מספר המגשים ויעילות ההפרדה הגרועה. זה מתאים להפרדת דגימות עם צלחות TLC פתוחות יחסית, במיוחד לדגימות עם טומאה קוטבית אחת בלבד במוצר; מרבית זמנו מבזבזים על טיפול לפני תרכובות, תוך הסרת כמה זיהומים לפני הטיהור הקפדני. יש לציין כי אידוי ממס הנגרם כתוצאה מלחץ שלילי במהלך השימוש יכול להוביל לעיבוי של מספר גדול של טיפות מים על המשטח החיצוני של העמוד. אין לנסות בקלות תרכובות רגישות למים.
העברת עמודת לחץ אטמוספרית היא שיטת ההפרדה היעילה ביותר מבין השלושה, אך מכיוון שהממס לרוב נע לאט מדי, אפילו אפקט ההפרדה הטוב ביותר יכול להשפיע על היעילות. לפיכך, בדרך כלל מיושם לחץ בשלב זה, הנקרא עמוד בלחץ שעובר; אבל הלחץ לא אמור להיות גבוה מדי. באופן כללי, כדור שרשרת כפול משמש להפעלה ידנית, ומשאבת דגים משמשת להפעלה אוטומטית. ניתן לשנות את שניהם כפי שמוצג בתמונה.
תהליך מעבר עמודים קונבנציונאלי:
עבודות הכנה צריכות להיעשות היטב:
בבחירת עמודה, שימו לב אם יש לוח מלטש. עבור עמודים ללא לוחות מלטש, זכור למלא את התחתית בכותנה מסוימת. הכותנה לא צריכה להיות סמיכה מדי או דקה מדי, כל עוד היא יכולה לחסום את הסיליקון מלהירד. (הבלוגר פירק ישירות קולב בגדים והשתמש בו כדי להכניס כותנה לשקע על התקע)
הכן את קוטביות המינימלית אלואנט, מנורת UV (מומלצת לאנשי מעבדה, כף יד, מוכנה לצלם בכל עת), ציוד לחץ ומתלה צינורות מבחן לפי הצורך!
בחר עמודה מתאימה, הוסף ג'ל סיליקון, משרים את ג'ל הסיליקון ושטח אותו
הבחירה שלכרומטוגרפיה של טור קונבנציונאליחשוב מאוד, ויש לחשב את גודלם על סמך כמות המוצר, אשר בדרך כלל ניתן לחלק אותם ל:
כמה מיליגרם של טור (הבחירה הסופית לסינתזה מוחלטת);
טור של כמה עשרות מיליגרם (מצע התפשטות מתודולוגית);
500 מיליגרם ל 1 גרם טור (באמצעות מתודולוגיה כחומר גלם);
עמודים סביב 5 גרם ומאזניים גדולים יותר.
היחס הנפוץ ביותר בקוטר העמוד לגובה במעבדה הוא בדרך כלל בין 1: 2.5 ל- 1:15. כמות ג'ל הסיליקה המשמשת כשלב נייח במהלך העמסת מדגם היא פי 20 עד 40 מהמדגם. התקן לבחירת עמודות צריך להיות מבוסס על מצב טיפוס צלחת TLC של המדגם שלך. אם יש הרבה זיהומים בסמיכות, נסה לבחור בעמודה גדולה ככל האפשר, כך שניתן יהיה לכסות את הדגימה שלך בשכבה דקה קטנה (עובי מומלץ מתחת ל -5 מ"מ). אם הזיהומים רחוקים, עובי זה יכול להיות מוגדל באופן טבעי, אך לא מומלץ לעובי הדגימה שלך יעלה על 2 ס"מ, אלא אם כן המוצר פשוט נשטף.
אנשים רבים טועים לחשוב שמוסיפים יותר סיליקון, גם אם הוא עבה יותר במדגם שלי, האם ניתן להפריד אותו היטב? התשובה הזו שלילית!
הסיבה היא שהאנשים האלה מעולם לא חשבו שהדגימות שמתחת ומעלה לא רצו באותו קו, כך שהם יכלו להשיג רק כמה טהורים, שרובם חצו, שלא לדבר על טמאים, בזבוז זמן וממיסים!
זו גם הסיבה שהמדגם דורש דילול!
לאחר בחירת העמודה, הוספת סיליקון יכולה להיעשות באמצעות משפך האכלה. יחד עם זאת, הקפידו ללבוש מסכה ולפעול במכסה המנוע. הסיבה לכך לא תפרט על ידי הבלוגר (סיליקוזיס).
באשר לחדירה של ג'ל סיליקה, התהליך המומלץ הוא: ראשית, הניחו את עמוד הג'ל הסיליקה עם ג'ל הסיליקה המותקן אנכית, משטחים את פני הג'ל הסיליקה ביד, חברו את החלק התחתון של עמוד הג'ל הסיליקה למשאבת מים, שאבתם את ג'ל הסיליקה, ואז שפכו את העל הקוטבי המעט מלמעלה. כאשר האלואנט עומד לדלוף החוצה, סגור את שסתום הכיבוי כדי למנוע את שאיבת הממס למשאבת המים.
ואז, בלחץ, ג'ל הסיליקון יכול להיות ספוג באופן אחיד על ידי שטיפת שבעה או שמונה נפחי עמודים עם הכמות הקטנה ביותר של חומר מתפתח.
לדוגמא למעלה
הדגימה מחולקת לדגימה רטובה ודגימה יבשה.
(1) דגימה רטובה.
השיטה המומלצת היא להשתמש בפיפטה עם קצה גומי כדי למצוץ את הדגימה, קרוב לחלק העליון של ג'ל הסיליקון, לטפטף את הדגימה לאט ושיד, עד שהיא מכסה שכבה, ואז הפסיקו להוסיף את הדגימה ולהפעיל לחץ מסוים כדי לטבול את החומר השומני לשכבת ג'ל הסיליקון; טבלו את החומר השומני לשכבת הסיליקון וחזרו על תהליך זה מספר פעמים עד לטעינת כל הדגימות!
חלק מהתלמידים החדשים עשויים להיות סקרנים מדוע פעולה זו מתבצעת במקום לציין את שמן התהליך הרטוב כמו חומר בבת אחת?
למעשה, פעולה זו יכולה להפחית את הגובה היעיל של שכבת הדגימה. בשלב זה, כרומטוגרפיה של העמודות כבר החלה, והדגימות שלאחר מכן הן כמו ממסים שדוחפים את הדגימות הקודמות לספוג ולסופג בסיליקה ג'ל.
(2) באשר לדגימה יבשה.
אלא אם כן נחוץ לחלוטין, זה לא מומלץ. דגימות מוצקות מומלצות יותר להיות מכות או להתגבש. "שיטות חסרות מצפון, אתיל אצטט לעומת מים, תנודה קולית סייעה להתגבשות של נפט רותח גבוה" ו"חלוקת שיטת התגבשות מעבדה ".
דגימה יבשה מביאה בדרך כלל שתי בעיות; מצד אחד, בתהליך ערבוב הדגימה, האפשרות לתגובה בין הדגימה לסיליקה ג'ל עולה בגלל הצורך להעלות את הטמפרטורה לאידוי סיבוב; מצד שני, עומס יבש פירושו כי סופגים יוכנסו לשכבת הדגימה, ויגדילו את גובה שכבת הדגימה או את גודל העמודה, הדורשים יותר זמן ויותר ממס.
אם אין ברירה אחרת, פשוט שפכו את אבקת הספיגה לאט לאט לעמודה לטעינה, עם כמה דרישות הדומות לשיטות רטובות.
הוסף נתרן גופרתי נטול מים או קוורץ
על מנת להימנע מהשפעה על שכבת הדגימה במהלך הוספת אלואנט, הגורם לחוסר אחידות, עיוות והשפעה על יעילות ההפרדה, בדרך כלל מונחת שכבה של נתרן גופרתי נטול מים או קוורץ על גבי שכבת הדגימה.
המהנדסים שלנו מעדיפים באופן אישי להניח נתרן גופרתי נטול מים מכיוון שיש לו גם תפקוד ייבוש והוא ידידותי לממסים כמו דיכלורומטאן, המועדים להתנפצות, ספיגת חום ועיבוי!
חיסול שיפוע, דגימה ואיסוף
לאחר העמסה, שוטפים תחילה את העמודה בממס קוטבי קטן (ממס שלא יאפשר למוצר לעבור) עבור נפחי העמודה 2-3 (נפח עמודות אחד מוגדר כנפח השלב הנייד הזורם והחוצה) כדי להבטיח אחידות, ואז בחר חלק לצורך elution.
כיצד לבחור את ה- Eluent שעובר דרך העמודה?
היחס בין Aluent הוא היחס כאשר המוצר שלך מגיע לערך RF של בערך 0. 2 על צלחת TLC
זו החוויה של שטיפת עמודות שקראתי ספרים רבים ושיתפתי, והתהליך בפועל גם דומה מאוד. באופן אישי, אני מעדיף להפחית את השיפוע לפי פעמיים.
לדוגמה, אם הממס לטיפוס צלחות TLC הוא PE/EA =2: 1, סביר יותר שהבלוגר יתחיל את חיסול שיפוע מ- PE/EA =4: 1 ויסתיים ב- PE/EA =2: 1, בדרך כלל כתוצאה מתוצאות טובות יותר.
ישנן גם טכניקות בעת איסוף אלואנט. תחילה תוכל לבחור צינור מבחן גדול יותר כדי לקבל אותו, וכאשר TLC מתקרב לנקודת היעד, עבר לצינור מבחן קטן יותר. זה יכול להפחית את האפשרות לקבל יותר ולהימנע מזיהומים.
אם אתה נתקל במצבים שבהם נקודות הטומאה ונקודות המוצר קרובות זו לזו, במיוחד אלה עם פלואורסצנט חלש, זכור שלא להפעיל לחץ. במקום זאת, בחר להעביר את העמודה בלחץ רגיל, ושנה את הצינור בכל פעם שחצי צינורות או פחות מחוברים, מה שיכול גם להגדיל את ההסתברות לטיהור.
זכור לא להתמודד עם העמוד במועד!
לאנשים רבים יש הרגל להניח שהטור עבר וייבש כאשר אין מוצר בצינורות אחד או שניים לאחר TLC בשלב המאוחר.
הבנתי רק שהתשואה הייתה נמוכה מדי כשחישבתי אותה, או כשהלכתי לעשות ספקטרום, גיליתי שהספקטרום אינו נכון והחמצתי את הנקודה הלא נכונה. הצטערתי על זה עמוק.
לכן מומלץ שלא תמהרו לעבד את הטור לאחר השלמת הנקודה הרצויה. במקום זאת, בצע תהודה מגנטית גרעינית כך שתתאים לתשואה לפני העיבוד.
אם אתה עסוק או ממהר לטהר תרכובות אחרות עם זהכרומטוגרפיה של טור קונבנציונאלי, מומלץ לשטוף עם קוטביות גבוהה ממיס מעורב שפירה ולהשאיר את החלק הזה של ה- Eluent בנפרד לתוצאות זיהוי.
תגיות פופולריות: כרומטוגרפיה של טור קונבנציונאלי, יצרני כרומטוגרפיה של סין קונבנציונלית, ספקים, מפעל
שלח החקירה
