צנטריפוגה במהירות נמוכה

A צנטריפוגה במהירות נמוכהסיבובים ליצירת כוח צנטריפוגלי המפריד בין רכיבים בצפיפות שונה במדגם. במהלך הפרדת תאים, תאים, שברי תאים וביומולקולות אחרות מופרדים למקומות שונים על ידי כוח צנטריפוגלי, תלוי במסה ובצפיפותם. באופן ספציפי, כאשר צינור הדגימה מסתובב במהירות גבוהה בתוך הרוטור הצנטריפוגה, הכוח הצנטריפוגלי ברכיבים השונים של התערובת הוא פרופורציונאלי למסה שלהם, והוא מושפע גם מהמהירות ורדיוס הסיבוב. תאים או חלקיקים גדולים יותר נזרקים לכיוון קרקעית צינור הצנטריפוגה, ואילו רכיבים קטנים יותר נשארים בשכבה העליונה. עיקרון זה של הפרדה המבוססת על צפיפות ומסה הופך צנטריפוגות במהירות נמוכה לכלי אידיאלי להפרדת תאים.

● בחירת המהירות והזמן הצנטריפוגלי הנכון: בחירת המהירות והזמן היא קריטית ליעילות ההפרדה בתאים. מהירות סיבוב גבוהה מדי עלולה להוביל לקרע או נזק לתאים, בעוד זמן ארוך מדי עלול להוביל לצבירת תאים או משקעים לא שלמים. לפיכך, יש לקחת בחשבון את בחירת הפרמטרים הצנטריפוגלים לפי סוג, גודל וצפיפות התאים.
● להבטיח יתרת מדגם: איזון מדגם הוא המפתח למניעת הצנטריפוגה לייצר רטט ורעש במהלך הפעולה. בעת הצבת דגימות יש צורך להבטיח שהדגימות בכל צינורות הצנטריפוגה יהיו בעלות מסה שווה או דומה. אם יש הבדל גדול באיכות הדגימה, ניתן להוסיף כמות מתאימה של חיץ או מלח רגיל לצינור הצנטריפוגה הקל יותר כדי להשיג איזון.
● בחר את צינור הצנטריפוגה הימני: האיכות וההידוק של צינור הצנטריפוגה משפיעים גם הם על היעילות של הפרדת תאים. צינורות צנטריפוגלים באיכות גבוהה הם בעלי עמידות בפני איטום ועמידות בפני קורוזיה, שיכולות למנוע ביעילות דליפת מדגם וזיהום. במקביל, יש לבחור גם את המפרט של הצינור הצנטריפוגלי בהתאם לנפח המדגם וכוח הצנטריפוגלי הנדרש.
● שימו לב לתחזוקה ותחזוקה של הצנטריפוגה: נקה באופן קבוע את החדר הצנטריפוגלי ואת הרוטור של הצנטריפוגה כדי למנוע זיהום שיורי מדגם. נגב נקי בזמן לאחר השימוש כדי למנוע קורוזיה הנגרמת על ידי שאריות נוזליות. יחד עם זאת, יש צורך לבדוק באופן קבוע את כבל החשמל והתקע ורכיבים אחרים של הצנטריפוגה כדי להבטיח שהם יהיו שלמים ולהימנע ממפגעי בטיחות.

● טיפול בתאים בהנדסה גנטית: בהנדסה גנטית, תאים לרוב צריכים להיות מתורבתים, לניתוח, לוקרן ולטפולים אחרים. ניתן להשתמש בצנטריפוגות במהירות נמוכה לצעדים כמו ריכוז ושטיפת השעיות תאים, כמו גם איסוף תאים לאחר transfection. על ידי צנטריפוגה, ניתן להסיר זיהומים ותאים לא מוסכמים במדיום תרבית התא, וניתן לשפר את היעילות והטהרה של transfection גנים.
● טיהור חלבונים ובידוד: במחקר חלבונים, יש לטהר חלבונים ספציפיים מדגימות ביולוגיות מורכבות. ניתן להשתמש בצנטריפוגות במהירות נמוכה להבהרה ראשונית של פתרונות חלבון והסרת זיהומים, כמו פסולת תאים, חומצות גרעין וכו 'על ידי טיפול בצנטריפוגלי, ניתן להשיג תמיסת חלבון טהורה יחסית, המספקת את הבסיס לשלבי טיהור עוקבים.
● בידוד וטיהור של חלקיקי הנגיף: חלקיקי הנגיף בדרך כלל בעלי צפיפות וגודל ספציפיים וניתן להפריד אותם ולטהר על ידי צנטריפוגות במהירות נמוכה. לדוגמה, במחקר וירולוגיה ניתן להפריד בין חלקיקים ויראליים מתרבויות תאים באמצעות צנטריפוגה דיפרנציאלית. שיטה זו מנצלת את ההבדלים בכוחות הצנטריפוגלים במהירויות שונות כדי להפריד בין חלקיקים ויראליים לרכיבים סלולריים אחרים.
● ייצור ובקרת איכות של תרופות ביולוגיות: בתהליך הייצור של תרופות ביולוגיות, לעתים קרובות משתמשים בצנטריפוגות במהירות נמוכה להבהרת נוזל תרבית התאים, הסרת פסולת תאים והפרדה ראשונית של מוצרי תרופות. בנוסף, בבקרת האיכות של תרופות, ניתן להשתמש בצנטריפוגות במהירות נמוכה גם כדי לאתר מדדי מפתח כמו חלוקת הגודל ויציבותם של חלקיקי התרופות.

◇ הפרדה ראשונית: צנטריפוגות במהירות נמוכה משמשות לרוב להפרדה ראשונית של חלקיקי הנגיף. בתהליך מיצוי הנגיף ניתן להסיר חלקיקים גדולים כמו שברי תאים וזיהומים על ידי צנטריפוגה במהירות נמוכה, וניתן להשיג השעיית נגיף טהורה יחסית. שלב זה מאפשר את שלבי הטיהור שלאחר מכן.
◇ העשרת וירוסים: במקרים מסוימים, צנטריפוגות במהירות נמוכה יכולות לשמש גם להעשרת וירוסים. על ידי התאמת זמן הצנטריפוגה והמהירות, ניתן להפקיד את חלקיקי הנגיף בתחתית צינור הצנטריפוגה, כך שניתן יהיה להשיג את דגימת הנגיף המרוכז על ידי חילוץ הסופר -נפט. עם זאת, יש לציין כי השפעת ההעשרה של צנטריפוגות במהירות נמוכה מוגבלת יחסית, ובמקרים בהם נדרשים נגיפים בעלי שיטוט גבוה, בדרך כלל נדרשות שיטות טיהור אחרות.

 

● שיטה צנטריפוגלית דיפרנציאלית: שיטה צנטריפוגלית דיפרנציאלית היא שיטה להפרדת חלקיקים בגדלים וצפיפות שונים תוך שימוש במהירויות שונות ותקופות צנטריפוגליות. צנטריפוגה דיפרנציאלית משמשת לרוב כדי להסיר עוד יותר את הזיהומים ולרכז את הנגיף במהלך טיהור הנגיף. לאחר הסרת חלקיקים גדולים כמו אברונים על ידי צנטריפוגה במהירות נמוכה, חלקיקי הנגיף משקעים על ידי צנטריפוגה במהירות גבוהה.
● שיטת צנטריפוגה של צפיפות צפיפות: שיטת צנטריפוגה של צפיפות צפיפות היא השימוש בתקשורת של צפיפות שונה ליצירת שיפוע, כך שחלקיקים של צפיפות שונה מסתפקים במיקומים שונים בשיטת השיפוע. בטיהור הנגיף, צנטריפוגה של שיפוע צפיפות משמשת לרוב להפרדת חלקיקי הנגיף לבין זיהומים אחרים בצפיפות דומה (כמו חלבונים, חומצות גרעין וכו '). על ידי הכנת שיפוע הצפיפות בצינור הצנטריפוגה מראש, ואז הוספת מתלה הנגיף על פני השיפוע לצנטריפוגה, חלקיקי הנגיף יתיישבו במצב ספציפי בדרגה ליצירת אזור משקעים.
● שיטת משקעים: שיטת המשקעים היא לזרז את חלקיקי הנגיף על ידי הוספת ריאגנטים כימיים. חומרים משקעים נפוצים כוללים אמוניום סולפט, פוליאתילן גליקול (PEG) וכו '. ניתן להשתמש בשיטת המשקעים לצורך טיהור נוסף של הנגיף. על ידי התאמת הריכוז וערך ה- pH של המשקע, ניתן לזרז באופן סלקטיבי את חלקיקי הנגיף כדי להסיר את הזיהומים.
● שיטת סינון: שיטת סינון היא שיטה להפרדת חלקיקי נגיף לבין זיהומים אחרים על ידי עמוד כרומטוגרפיה של סינון ג'ל. העמודה הכרומטוגרפית של מסנן הג'ל מופרדת על פי גודל החלקיקים, והמולקולות הגדולות זורמות תחילה מהעמודה הכרומטוגרפית, והמולקולות הקטנות זורמות אחר כך. על ידי בחירת מצבים מתאימים של ג'ל וכרומטוגרפי מתאימים, ניתן להפריד ביעילות חלקיקי הנגיף מזיהומים אחרים.
● שיטה אלקטרופורטית: שיטה אלקטרופורטית היא שימוש בפעולה בשדה חשמלי לייצור חלקיקים טעונים בשיטת הנדידת השדה החשמלי. בטיהור הנגיף, אלקטרופורזה משמשת לרוב להפרדת חלקיקים נגיפיים לבין זיהומים טעונים אחרים. ניתן להשיג את ההפרדה והטיהור היעילים של חלקיקי הנגיף על ידי בחירת תנאי אלקטרופורזה מתאימים ומדיה.

תגיות פופולריות: צנטריפוגה במהירות נמוכה, יצרני צנטריפוגה במהירות נמוכה, ספקים, מפעל